Анализ уровня и активности тромбоцитов крови: методы исследования и особенности процедуры забора крови

Анализ уровня и активности тромбоцитов крови: методы исследования и особенности процедуры забора крови

Тромбоциты — безъядерные форменные элементы крови, активно участвующие в процессе ее свертывания. В их задачи входит защита стенок сосудов от механических повреждений и предотвращение кровопотерь. Кроме того, доказано антипаразитарное действие тромбоцитов и их участие в регенерации пораженных тканей.

Как и все другие клетки крови, тромбоциты могут иметь повышенную или пониженную концентрацию в плазме, а также «страдать» функциональными нарушениями деятельности. Рассмотрим, какими методами проводят исследования на тромбоциты и какие результаты проведенного анализа можно считать нормой, а какие — отклонениями.

Показатель «тромбоциты» в анализе крови

Тромбоциты отличаются очень маленькими размерами — всего 2–3 микрона в диаметре, что значительно меньше показателей других форменных элементов крови. Эти бесцветные тельца образуются в красном костном мозге из самых крупных ядерных клеток в организме — мегакариоцитов. Мегакариоцитарная цитоплазма как бы делится, или «линяет», отпуская в кровоток свои обрывки — тромбоциты.

Если происходит повреждение сосуда, то в организме образуются вещества, которые заставляют тромбоциты переходить в активную форму и «притягиваться» к месту травматического события и друг к другу.

Длительность жизни тромбоцита не превышает 10 дней, поэтому клетки в крови постоянно обновляются. Если же происходит нарушение баланса между образованием и разрушением этих элементов, то у человека возникает склонность к тромбообразованию или, наоборот, к повышенной кровоточивости.

Исследование тромбоцитов проводится в рамках общего анализа крови и позволяет оценить свертываемость. Подсчет количества этих тел производится в штуках на единицу (литр, микролитр) объема крови. Концентрация тромбоцитов в бланках результата анализа обозначается в одном из равнозначных вариантов, например:

  • 250 тыс./мкл;
  • 250×10 3 клеток/мкл;
  • 250×10 9 Ед/л;

Анализы крови на тромбоциты и свертываемость

Анализ крови на тромбоциты является важным этапом в процессе диагностики нарушений свертываемости и болезней костного мозга. Исследование также позволяет оценить эффективность проводимого лечения. Кроме того, определение активности этих клеток является обязательным шагом в процессе подготовки больного к предстоящей операции (позволяет оценить способность организма к преодолению кровотечений во время хирургического вмешательства).

Общий анализ крови на тромбоциты

Анализ на свертываемость является одним из самых простых и доступных методов исследования. Пациенту нужно отказываться от приема пищи в течение двух часов перед исследованием. Результаты готовы, как правило, через несколько часов. Такое тестирование проводится в рамках комплексного обследования организма, а также при наличии кровотечений невыясненной природы и при диагностике или контроле эффективности лечения патологий костного мозга. Референсные значения зависят от возраста, а в детстве — еще и от пола.

Анализы крови на свертываемость (агрегацию тромбоцитов)

Существует два наиболее простых и эффективных метода определения агрегации — по Сухареву и по Ли-Уайту. Оба способа отличаются высокой информативностью и позволяют получить дополнительные сведения об истории болезни.

Исследование по Ли-Уайту

Анализ на тромбоциты по Ли-Уайту — это определение скорости свертывания венозной крови в пробирке, позволяющее оценить время образования фермента протромбиназы. Исследование проводится на голодный желудок. Нормальное время свертывания при температуре 37°C составляет 4–7 минут, а при комнатной температуре — 15–25 минут.

Для проведения исследования у больного берется 3 мл венозного биоматериала, который потом распределяется по трем стеклянным пробиркам, нагретым на водяной бане до 37°C. Пробирки устанавливаются в штатив под наклоном в 50 градусов. После этого при помощи секундомера подсчитывается время до полного свертывания, при котором жидкость перестает вытекать при наклоне пробирок.

Анализ по Сухареву

Показатели в тесте капиллярной крови по Сухареву определяются у биоматериала, взятого у пациента натощак. Поскольку первая капля может содержать элементы тканей кожи, она стирается с пальца, для тестирования берется следующая порция.

Материал помещается в специальную пробирку — капилляр, который затем наклоняется в разные стороны под определенным углом. С помощью секундомера определяется время, когда жидкость перестает свободно перемещаться в сосуде. Нормальное время свертывания составляет: начало образования фибрина — 0,5–2 минуты, завершение — 3–5 минут.

Коагулограмма

Она представляет собой набор показателей, которые позволяют оценить процесс свертываемости, и включает целый комплекс исследований.

Прежде чем разбираться в сути тестирования, рассмотрим механизмы свертывания крови:

  • внутренний — реализуется при взаимодействии форменных элементов с коллагеном стенок сосудов;
  • внешний — запускается фактором III (тканевым тромбопластином), выделяемым поврежденными тканями.
Читайте также:  Анализ на энтеробиоз – как сдавать и сколько делается?

Внутренний путь характеризует АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время). Его продолжительность зависит от уровня факторов свертывания XII, XI, VIII, кининогена и прекалликреина. АЧТВ определяется по продолжительности формирования кровяного сгустка после добавления к биоматериалу пациента парциального тромбопластина и кальция. Отклонение параметров АЧТВ от нормы указывает на повышенный риск кровотечений или тромбоза. Этот показатель также определяется с целью контроля эффективности лечения гепарином.

Оценить внешний путь позволяет протромбиновый индекс , который представляет собой процентное соотношение периода свертывания плазмы и стандартного протромбинового времени (срок, за который происходит свертывание контрольной плазмы, смешанной с тканевым тромбопластином). Это исследование дает возможность обнаружить нарушения свертываемости, связанные с дефицитом фибриногена (фактора I), протромбина (II), проакцелерина (V), проконвертина (VII) и фактора Стюарта–Прауэра (X).

Фибриноген принимает участие в образовании фибрина, необходимого для формирования тромбов. Определение концентрации первого из них важно для оценки функций печени, а также для диагностики болезней, которые сопровождаются образованием тромбов или повышенной кровоточивостью.

Тромбиновое время — период трансформации фибриногена в фибрин. Его определение позволяет выявить антикоагулянтную активность крови. D-димер — это продукт распада фибрина. Его увеличение наблюдается при одновременной активации коагуляции и фибринолиза. Волчаночный антикоагулянт представляет собой антитела против отрицательно заряженных фосфолипидов. Наличие этих антител указывает на склонность к тромбозам при аутоиммунных патологиях, антифосфолипидном синдроме, СПИДе и системных заболеваниях.

Антитромбин III, протеин C и протеин S свободный (последние два усиливают действие друг друга) являются факторами, препятствующими свертыванию. При их недостатке повышается свертываемость и возрастает риск тромбоза. Плазминоген ограничивает активность свертывания при повреждениях сосудов, участвует в растворении тромбов и заживлении повреждений кожи и слизистых. Он также активизируется во время острой фазы воспаления.

Анализ сдается на голодный желудок (после 12 часов воздержания от приема пищи). Для исследования используется венозная кровь. Перед сдачей биоматериала следует в течение получаса воздерживаться от курения, а также физического и эмоционального напряжения.

Расшифровка результатов анализа на тромбоциты

Биохимический анализ крови на тромбоциты проводится при нарушениях свертываемости, патологиях костного мозга (в частности, при лейкозе), анемии, необъяснимых синяках, склонности к кровотечениям, при ишемиях и тромбозах, а также перед операциями.

Норма тромбоцитов в анализе крови

Референсные значения зависят от возраста пациента. Так, у младенца в возрасте до 10 дней норма составляет 99–421×10 9 Ед/л, но постепенно повышается и к 6 месяцам достигает 180–400×10 9 Ед/л, причем у девочек концентрация тромбоцитов всегда немного выше. У детей старше 6 лет и у взрослых нормальное число этих кровяных клеток колеблется в пределах 150–450×10 9 Ед/л.

Значительное повышение их количества (1000×10 9 Ед/л и выше) способствует тромбообразованию, а снижение до 20×10 9 Ед/л и ниже может приводить к кровотечениям. Если показатели опускаются до 5×10 9 Ед/л, то в большинстве случаев больной умирает. Результат при беременности может быть несколько снижен (на 10–20% от нормы), что объясняется добавлением третьего круга кровообращения и некоторым разжижением крови.

Повышенные значения показателей тромбоцитов

Повышенные тромбоциты могут указывать на инфаркт миокарда, заболевания «щитовидки», наличие злокачественных образований в костном мозге и других органах, травмы, воспалительные процессы, анемии (гемолитические и после кровопотерь), туберкулез, полицитемии, воспаления кишечника, почечную недостаточность. Подобное состояние отмечается при сильной кровопотере, а также у больных с удаленной селезенкой (именно этот орган обеспечивает разрушение и утилизацию старых, дегенерирующих клеток). Самая частая причина высоких концентраций тромбоцитов в крови, устраняемая при помощи терапевтических доз аспирина, — пожилой возраст. Вторая — несбалансированное, неправильное питание и образ жизни в целом. Физиологической нормой считаются повышенные значения красных кровяных телец после тяжелых физических нагрузок, например, занятий спортом.

Тромбоцитоз — обобщенное название состояний с повышенным содержанием тромбоцитов в крови, иногда он может наблюдаться даже при обезвоживании в жаркую погоду.

Пониженные показатели

В анализе крови пониженные тромбоциты наблюдаются у беременных женщин, что обычно считается физиологической нормой. Это же относится к приему лекарственных средств, угнетающих продукцию тромбоцитов. Уменьшение концентрации тромбоцитов также может быть обусловлено анемиями (В12-дефицитной, фолиево-дефицитной и апластической), вирусными и бактериальными инфекциями, аутоиммунными заболеваниями, врожденными тромбоцитопенией и спленомегалией.

С результатами исследования анализа крови на тромбоциты следует обратиться к врачу — терапевту или гематологу. При отклонении показателей от нормы он назначит дальнейшие исследования, а после постановки диагноза — адекватное лечение. Пациенту также следует нормализовать рацион питания (обогатить его микроэлементами). Если причина сниженного количества тромбоцитов уже устранена, то для ускорения процесса нормализации показателей диетологи советуют увеличить потребление продуктов, богатых витаминами А и С.

Читайте также:  Какой анализ на описторхоз наиболее достоверный

Что­бы по­лу­чить кор­рект­ные ре­зуль­та­ты ис­сле­до­ва­ния, не за­бы­вай­те про эле­мен­тар­ные пра­ви­ла под­го­тов­ки к ана­ли­зам на тром­бо­ци­ты: до за­бо­ра кро­ви воз­дер­жи­тесь от при­ема пи­щи не ме­нее чем за 4 ча­са, уме­рен­но по­треб­ляй­те жид­кость, ис­клю­чи­те вы­со­кие фи­зи­чес­кие и эмо­ци­о­наль­ные на­груз­ки за 2–3 дня и, на­ко­нец, если по­зво­лит врач, от­ка­жи­тесь от при­ема ле­кар­ст­вен­ных пре­па­ра­тов, раз­жи­жа­ю­щих кровь (на­при­мер, ас­пи­ри­на).

Лабораторные исследования при заболеваниях крови

Клинический анализ крови

Клинический анализ крови (общий анализ крови) — это лабораторное исследование, позволяющее оценить качественный и количественный состав крови. Данное исследование включает в себя определение следующих показателей:

  • количество и качество эритроцитов,
  • цветовой показатель,
  • величина гематокрита,
  • содержание гемоглобина,
  • скорость оседания эритроцитов,
  • количество тромбоцитов,
  • количество лейкоцитов, а также процентное соотношение различных видов лейкоцитов в периферической крови.

Подробно о клиническом анализе крови можно прочитать в этой статье.

Пункционная диагностика

Морфологический состав крови не всегда отражает изменения, возникающие в кроветворных органах. Поэтому с целью верификации диагноза и количественной оценки функции костно-мозгового кроветворения у гематологических больных, а также с целью контроля за эффективностью лечения проводят морфологическое исследование костного мозга.

Для этого используют 2 метода:

  1. Стернальная пункция — метод, предложенный в 1927 году М.И. Аринкиным, технически более прост, не требует присутствия хирурга и может выполняться в амбулаторных условиях.
  2. Трепанобиопсия гребешка подвздошной кости — метод является более точным, поскольку получаемые срезы костного мозга полностью сохраняют архитектонику органа, позволяют оценить диффузный или очаговый характер изменений в нем, исследовать соотношение кроветворной и жировой тканей, выявить атипичные клетки.

Основными показаниями для исследования костного мозга являются алейкемические формы лейкозов, эритремия, миелофиброз и другие миелопролиферативные и лимфопролиферативные заболевания, гипо- и апластические анемии.

В настоящее время для детального анализа гемопоэза перспективным направлением в теоретическом и практическом плане является метод клонирования клеточных кроветворных популяций. Этот метод позволяет клонировать различные клеточные кроветворные популяции, прогнозировать течение заболевания, осуществлять контроль за эффективностью проводимой терапии.

Клональные методы широко используются при аутологичной и аллогенной трансплантации костного мозга человека для оценки качества донорского трансплантата и контроля за эффективностью его приживания у реципиента.

Исследование системы гемостаза

Система гемостаза представляет собой сложную многофакторную биологическую систему, основными функциями которой являются остановка кровотечения путем поддержания целостности кровеносных сосудов и достаточно быстрого их тромбирования при повреждениях и сохранение жидкого состояния крови.

Эти функции обеспечиваются следующими системами гемостаза:

  • стенками кровеносных сосудов;
  • форменными элементами крови;
  • многочисленными плазменными системами, включающими свертывающую, противосвертывающую и другие.

При повреждении сосудов запускаются два основных механизма остановки кровотечения:

  • первичный, или сосудисто-тромбоцитарный, гемостаз, обусловленный спазмом сосудов и их механической закупоркой агрегатами тромбоцитов с образованием “белого тромба”;
  • вторичный, или коагуляционный, гемостаз, протекающий с использованием многочисленных факторов свертывания крови и обеспечивающий плотную закупорку поврежденных сосудов фибриновым тромбом (красным кровяным сгустком).

Методы исследования сосудисто-тромбоцитарного гемостаза

Наиболее распространенными являются следующие показатели и методы их определения:

Резистентность капилляров. Из методов оценки ломкости капилляров чаще всего используется манжеточная проба Румпель — Лееде — Кончаловского. Через 5 минут после наложения манжеты для измерения АД на плечо и создания в ней давления, равного 100 мм рт. ст., ниже манжеты появляется определенное количество петехий. Нормой является образование в этой зоне менее 10 петехий. При повышении проницаемости сосудов или тромбоцитопении число петехий в этой зоне превышает 10 (положительная проба).

Время кровотечения. Данный тест основан на изучении длительности кровотечения из участка прокола кожи. Нормативные показатели длительности кровотечения при определении по методу Дьюке — не выше 4 минут. Увеличение длительности кровотечения наблюдается при тромбоцитопениях или/и тромбоцитопатиях.

Определение количества тромбоцитов. Число тромбоцитов у здорового человека в среднем составляет 250 тыс. (180—360 тыс.) в 1 мкл крови. В настоящее время для определения числа тромбоцитов существует несколько лабораторных технологий.

Ретракция сгустка крови. Для ее оценки чаще всего используют непрямой метод: измеряют объем сыворотки, выделяемой из сгустка крови при ее ретракции по отношению к объему плазмы в исследуемой крови. В норме показатель равен 40 — 95%. Его уменьшение наблюдается при тромбоцитопениях.

Читайте также:  Кандида альбиканс у мужчин, женщин и детей – пути передачи, норма в анализах, препараты для лечения

Определение ретенции (адгезивности) тромбоцитов. Чаще используется метод, основанный на подсчете числа тромбоцитов в венозной крови до и после ее пропускания с определенной скоростью через стандартную колонку со стеклянными шариками. У здоровых людей индекс ретенции составляет 20 — 55%. Уменьшение показателя наблюдается при нарушении адгезии тромбоцитов у больных с врожденными тромбоцитопатиями.

Определение агрегации тромбоцитов. Наиболее интегральную характеристику агрегационной способности тромбоцитов можно получить при спектрофотометрической или фотометрической количественной регистрации процесса агрегации с помощью агрегографа. В основе метода лежит графическая регистрация изменения оптической плотности тромбоцитарной плазмы при перемешивании ее со стимуляторами агрегации. В качестве стимуляторов можно использовать АДФ, коллаген, бычий фибриноген или ристомицин.

Коагуляционный гемостаз

Процесс свертывания крови принято условно разделять на две основные фазы:

  1. фаза активации — многоступенчатый этап свертывания, который завершается активацией протромбина (фактор II) тромбокиназой c превращением его в активный фермент тромбин (фактор IIa);
  2. фаза коагуляции — конечный этап свертывания, в результате которого под влиянием тромбина фибриноген (фактор I) превращается в фибрин.

Для исследования процессов гемокоагуляции используются следующие показатели:

  • время свертывания крови,
  • активированное время рекальцификации плазмы (норма с хлоридом кальция 60 — 120 с, с коалином 50 — 70 с),
  • активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) (норма 35 — 50 с),
  • протромбиновое время (ПТВ) (норма: 12 — 18 с),
  • тромбиновое время (норма 15 — 18 с),
  • протромбиновый индекс (ПТИ) (норма 90 — 100%),
  • аутокоагуляционный тест,
  • тромбоэластографию.

Преимуществом среди этих методов обладают три теста: ПТИ, АЧТВ и международное нормализованное отношение (МНО), так как они позволяют судить не только о состоянии всей свертывающей системы крови, но и недостаточности отдельных факторов.

МНО – показатель, который рассчитывается при определении ПТВ. Показатель МНО был введён в клиническую практику, чтобы стандартизировать результаты теста ПТВ, поскольку результаты ПТВ варьируют в зависимости от типа реагента (тромбопластина), используемого в разных лабораториях.

Определение МНО гарантирует возможность сравнения результатов при определении ПТВ, обеспечивая точный контроль терапии непрямыми антикоагулянтами. Рекомендуются два уровня интенсивности лечения непрямыми антикоагулянтами: менее интенсивный — показатель МНО равен 1,5 — 2,0 и более интенсивный — МНО равен 2,2 — 3,5.

При исследовании свертывающей системы крови важное значение имеет определение содержания фибриногена (норма 2 — 4 г/л). В патологии этот показатель может уменьшаться (ДВС-синдром, острый фибринолиз, тяжелое поражение печени) или увеличиваться (острые и хронические воспалительные заболевания, тромбозы и тромбоэмболии). Большое значение имеет также определение высокомолекулярных производных фибриногена, растворимых фибрин-мономерных комплексов, продуктов деградации фибрина.

В условиях физиологической нормы ограничение процессов плазмокоагуляции осуществляют антикоагулянты, которые подразделяются на две группы:

  1. первичные, постоянно содержащиеся в крови — антитромбин III, гепарин, протеин С, α2-макроглобулин и др.;
  2. вторичные, образующиеся в процессе свертывания и фибринолиза.

Среди этих факторов важнейшим является антитромбин III, на долю которого приходится 3/4 активности всех физиологических ингибиторов коагуляции. Дефицит этого фактора приводит к тяжелым тромботическим состояниям.

В крови даже при отсутствии повреждения сосудов постоянно происходит образование небольшого количества фибрина, расщепление и удаление которого осуществляет система фибринолиза. Основными методами исследования фибринолиза являются:

  • исследование времени и степени лизиса сгустков крови или эуглобулиновой фракции плазмы (норма 3-5 ч, с коалином – 4-10 мин);
  • определение концентрации плазминогена, его активаторов и ингибиторов;
  • выявление растворимых фибринмономерных комплексов и продуктов деградации фибриногена/фибрина.

Дополнительные методы исследования крови и мочи

При некоторых гематологических заболеваниях в крови можно определить аномальные белки — парапротеины. Они относятся к группе иммуноглобулинов, но отличаются от них по своим свойствам.

При миеломной болезни на электрофореграмме определяется гомогенная и интенсивная полоса М в области γ-, β- или (реже) α2-глобулиновых фракций. При болезни Вальденстрема пик аномальных макроглобулинов располагается в области между β- и γ-глобулиновыми фракциями. Но наиболее информативным методом для раннего выявления аномальных парапротеинов является иммуноэлектрофорез. У 60% больных с миеломной болезнью в моче, особенно на ранних стадиях, можно выявить низкомолекулярный протеин — белок Бенс-Джонса.

Ряд гематологических заболеваний характеризуется изменением осмотической резистентности эритроцитов. Метод основан на количественном определении степени гемолиза в гипотонических растворах хлорида натрия различной концентрации: от 0,1 до 1%. Понижение осмотической резистентности встречается при микросфероцитарной и аутоиммунной гемолитических анемиях, а повышение — при механической желтухе и талассемии.

Ссылка на основную публикацию